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含量甲醇溶液稀释至刻度

1.3.3 茶多酚标准溶液配置

分别称取对照品没食子酸、高效没食子酸儿茶素没食子酸酯、液相叶中表儿茶素、色谱时测表没食子酸儿茶素、法同表儿茶素没食子酸酯、定茶多酚表没食子酸儿茶素没食子酸酯标准品0.1g,种茶精密称定后分别置于100mL容量瓶中,含量甲醇溶液稀释至刻度,高效摇匀后即得对照品溶液1.00mg/mL,液相叶中置于-20℃冰箱中,色谱时测备用。法同

1.3.4 色谱条件选择

AgilentC18色谱柱(250mm×4.6mm,定茶多酚5.0μm),种茶流动相:A:0.3%甲酸水溶液;B:0.3%甲酸甲醇溶液;柱温:40℃;流速:1mL/min;检测波长:280nm;进样量:10μL;梯度程序:0min(85%A+15%B),含量60min(70%A+30%B),高效DAD检测器。

1.3.5 方法学测定

1.3.5.1 线性

分别取没食子酸、没食子酸儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、表没食子酸儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子酸儿茶素没食子酸酯储备液,配制成2.00、4.00、8.00、20.00、40.00、100.00μg/mL的系列标准工作液,高效液相色谱仪进样测定相应的峰面积,以峰面积为纵坐标,以浓度为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程和相关系数。

1.3.5.2 检测限和定量限

分别测定6种茶多酚检测限和定量限,检测限S/N为3,定量限为3倍检测限。

1.3.5.3 精密度

分别配制没食子酸、没食子酸儿茶素没食子酸酯、表儿茶素、表没食子酸儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子酸儿茶素没食子酸酯标准品溶液,按实验条件,平行测定6次。

1.3.5.4 加样回收率

分别取6种茶多酚标准溶液加入1mg标准品,进行加样回收率计算。

1.3.6 供试品制备

供试品茶粉0.5g,根据最优提取方法分别制备热水浸提溶液和醇提取液各5mL,样品采用0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液为供试品溶液,置-20℃冰箱中保存备用。

2 结果与分析

2.1 单因素实验

茶叶中总酚含量随时间、温度、固液比和乙醇浓度变化见表2。根据单因素实验确定响应面法优化热水浸提条件提取时间10~50min,温度60~100℃,固液比为4~8(mL/g),乙醇提取条件为时间20~60min,乙醇浓度0%~100%,固液比为4~9(mL/g)。

2.2 响应面法优化提取工艺

2.1.1 热水提取工艺

根据响应面法优化,确定提取温度为80℃,固液比为6∶1(mL/g);提取时间为29min,过滤取滤液,最优条件多酚含量为13.47mg/mL。

2.1.2 超声醇提取工艺

准确称取0.5g茶叶粉碎过60目筛的恒重茶粉末,根据响应面法优化,确定溶剂乙醇浓度50%,固液比6.5∶1(mL/g),提取时间40min,过滤取滤液,最优条件多酚含量为11.30mg/mL。

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